FORMULACIONES PARA SOLUCIONES MADRE (Murashige & Skoog 1962)

Cultivo in Vitro: Preparacion de Soluciones Madre (Murashige&Skoog 1962)

Las soluciones deben prepararse con mucho cuidado y precision. Las sales deben pesarse en una balanza granataria (prescision= 0.01 g) y en la balanza analitica se pesaran las vitaminas y reguladores de crecimiento (precision = 0.0001 g).

La conservacion de las soluciones madres se hara de 4-5 C. en el refrigerador, es recomendable no prolongar por mas de tres meses la conservacion de las soluciones madres de sales minerales. Las que contengan vitaminas y sustancias de crecimiento estables podran conservarse un maximo de 4 semanas.

1. MACRONUTRIENTES

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 1 L., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Foto 1. Algunos reactivos en estado puro.

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso deseado se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de macro nutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada, aproximadamente 100 ml.

Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo. Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 1 L. y con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico.

Foto 2. Preparacion de solucion madre de macronutrientes.

2.MICRONUTRIENTES

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 1 L., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso requerido se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Es importante que en los reactivos para la solución de micronutrientes se pese el valor requerido, porque con solo 1 miligramo de mas, o de menos, puede alterar el resultado final. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de micronutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada. Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo.

Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 200 ml. Con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico

3.QUELATO DE HIERRO

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer, agitador, rejilla de asbesto), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso requerido se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos.

En un Erlenmeyer se coloca el agua y el EDT y se lo lleva al fuego sobre una rejilla de asbesto. Cuando ha hervido se le adiciona el sulfato de hierro . Cuando vuelve a hervir se retira del fuego se deja enfriar. Se enrraza a 100 ml y se coloca en un envase color Ambar para evitar la degradacion de los componentes.

Foto 3. Der) preparacion de Quelato de hierro antes de colocar el sulfato de hierro. Izq) preparacion de Quelato de hierro despues de colocar el sulfato de hierro, notese el cambio de coloracion.

4.VITAMINAS.

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 100 mL., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso deseado se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de macro nutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada. Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo. Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 200 ml. y con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico

5.HORMONAS.

Las Auxinas y Giberelinas se disuelven con alcohol antiséptico (70º)

G3 10MG / ALCOHOL 5ML + AGUA DESTILADA 5 ML
ANA 12 MG / ALCOHOL 3 ML + AGUA DESTILADA 9 ML.
AIA 13 MG / ALCOHOL 5 ML + AGUA DESTILADA 8 ML.

Las Citocininas se disuelven con clorhídrico
BAP 10 MG…..HIDROXIDO 4 ML + AGUA DESTILADA 6 ML

Una vez prepradas las hormonas se las mantiene en congelación y al momento de utilizarlas se las calienta sobre una rejilla de asbesto las que se han congelado.

Monitoreo de Plagas

El monitoreador, es la persona encargada de realizar el monitoreo de las plagas todos los días; el monitoreo se realiza por las siguientes causas:

• para ver la incidencia de una plaga,
• para ver si el control se esta dando en el cultivo,
• para evaluar el estado de avance de la plaga.

Para el monitoreo se muestrea en el interior del invernadero, escogiendo partes al azar del invernadero, Se empieza en la primera cama coincidiendo con el comienzo de la nave (cada nave tiene 4 camas de lado a lado), y se salta a la ultima cama de la nave.

La forma de buscar plagas y enfermedades depende de esta misma, así, para araña, se busca en las hojas inferiores, en el envés, si la infección de araña es muy severa, se encontrara la misma hasta arriba de la planta. Para trips, se busca en los botones y las flores demasiado maduras, buscando entre los pétalos. La Botritis se busca en los botones. El oídium, se busca en el follaje de medios hacia arriba. El velloso, también se busca en la parte inferior del rosal.

Foto 1. Forma de monitoreos, izq.) Monitoreo de oidium en el follaje, der.) Buscando trips en una flor madura.

En esta floricola, hay 5 grados de severidad para ataque de una plaga o enfermedad, estos van de “0”, que significa ausencia total, hasta “5” que es incontrolable. Si se enuentra en un lugar se marca como “1” (semi-leve), si hay en 2 o 3 puntos del muestreo se marca como “2” (leve), y asi sucesivamente.

Todo lo observado por el monitoreador, se registra en un formulario, en grado de severidad de la plaga, por variedad, dentro de cada bloque; este formulario es entregado al programador para que puede basare en esto y asi poder establecer un control para la plaga que aqueja el cultivo.

Grafico 1. Grafica del invernadero mostrando la ruta de muestreo para el monitoriador, la linea azul es la ruta completa, los otros colores indican la entrada para los dias siguientes, asi, azul es el primer dia, rojo el segundo dia, verde el tercer dia, negro el cuarto dia y el quinto se vuelve a empezar por el azul.


Cuando se encuentran focos considerables durante el monitoreo en el cultivo, estos focos son señalizados con listones de colores, para que así los fumigadores puedan intensificar la aplicación en la zona; los colores son:

• Amarillo para Oidium
• Rojo para araña
• Azul para Trips

Foto 2. A, B y C) Listones de colores en el cultivo, indicando focos.

1.1.Identificación de las principales plagas y enfermedades

1.1.1. Mildeo polvoriento u Oidium

Investigación Vegetal Aplicada, 2001, Dice que la infección por mildeo polvoriento (Sphaeroteca pannosa) puede ocurrir en las rosas de invernadero en cualquier época del año. Inicialmente se observa una masa fungosa, polvorienta y blanca sobre las hojas, principalmente de la parte superior de la planta, formada por hifas (micelio) y esporangios. Cuando la infección es severa el hongo puede observarse también sobre el envés de las hojas, tallos y botones florales. La infección de las hojas jóvenes hace que se mal formen, pues afectan directamente el tejido foliar; en las hojas maduras se desarrollan manchas de color café.

La infección comienza desde el momento en que una espora llega a la superficie de la hoja (o del tallo o flor) luego de lo cual esta debe germinar. Para ello no se requiere agua, ya que la espora contiene un 70 % de humedad; la germinación usualmente tiene lugar durante la noche, cuando la humedad relativa es mas alta que durante el día.

La dispersión ocurre principalmente a través del aire y en menor medida a través de humanos y animales. Es imposible prevenir realmente la infección. Entre las variedades de rosa disponibles se encuentran diferencias de susceptibilidad a la infección por mildeo, de manera que una de las posibilidades es elegir una variedad menos sensible.

Foto 3. Arr.) Oidium atacando a un tallo, Abaj.) Invasión de Oidium en una espina del tallo.

Infoagro.com, 2007, señala que en el Oídio (Sphaerotheca pannosa), los síntomas, manchas blancas y pulverulentas, se manifiestan sobre tejidos tiernos como: brotes, hojas, botón floral y base de las espinas. Las hojas también se deforman apareciendo retorcidas o curvadas.

Foto 4. Oidium en una hoja.

1.1.1. Botrytis

Para Investigación Vegetal Aplicada (2001), la Botritis o moho gris es causada por Botryotinia fuckeliana (syn. Botrytis cinérea) que aparece sobre manchas muertas como una masa fungosa y un tanto polvorienta de color gris pardo, compuesta por micelio y esporangios. En principio, Botrytis puede infectar todas las partes aéreas de la planta. En los cultivos en sustratos, se manifiesta solamente durante la post-cosecha en forma de lesiones sobre las flores. Una infección es suficiente para que toda la flor se pudra por completo.

Foto 5. Botritis al tallo y boton.

Generalmente es un patógeno de plantas débiles, pues estas son infectadas bajo condiciones desfavorables como exceso de humedad relativa, alta densidad de siembra, frio, baja luminosidad, exceso de nitrógeno. En su mayor parte, la infección ocurre en material vegetal en descomposición, a través de heridas (podas, cosecha) o a través de partes muertas de la planta.

Infoagro.com (2007), En el Moho gris o Botrytis (Botrytis cinerea), su desarrollo se ve favorecido por las bajas temperaturas y elevada humedad relativa, dando lugar a la aparición de un crecimiento fúngico gris sobre cualquier zona de crecimiento, flores, etc. Asimismo hay que cuidar las posibles heridas originadas en las operaciones de poda, ya que son fácilmente conquistadas por el patógeno. Para el control de la enfermedad resultan de gran importancia las prácticas preventivas, manteniendo la limpieza del invernadero, ventilación, con la eliminación de plantas o partes enfermas y realizando tratamientos con fungicidas a base de iprodiona y procimidona.

1.1.3. Velloso

Para Infoagro.com (2007), El Mildiu velloso o tizón (Peronospora sparsa) provoca la enfermedad más peligrosa del rosal ya que ocasiona una rápida defoliación, sino se actúa a tiempo puede resultar muy difícil recuperar la planta.

Foto 6. Tallo atacado por el velloso


Se desarrolla favorablemente bajo condiciones de elevada humedad y temperatura, dando lugar a la aparición de manchas irregulares de color marrón o púrpura sobre el haz de las hojas, pecíolos y tallos, en las zonas de crecimiento activo. En el envés de las hojas pueden verse los cuerpos fructíferos del hongo, apareciendo pequeñas áreas grisáceas. Para prevenirlo debe mantenerse una adecuada ventilación en el invernadero. Además debe evitarse películas de agua sobre la planta ya que ésta favorece la germinación de las conidias.

1.1.4. Trips

Para Investigación Vegetal Aplicada (2001), En Holanda ocurren unas 1590 especies de trips (Thysanoptera), siendo las mas frecuentes en los invernaderos el trips occidental de las flores (Frankliniella occidentalis y el trips del tabaco Thrips tabaco).

Los trips se multiplican poniendo huevos en los tejidos vegetales blandos o suculentos. El trips occidental de las flores vive dentro de los botones florales, las yemas y las flores, lo que dificulta su control.

Con sus partes bucales extraen la savia vegetal; las células vacías toman inicialmente una tonalidad plateada, luego esos puntos se tornan cafés a medida que el tejido muere. Algunas especies raspan el tejido. También es frecuente observar los excrementos en forma de puntos negros. En la rosa, los trips causan daño especialmente a los pétalos y sépalos. Las infecciones severas causan daños en las hojas y las proporciones apicales de los brotes.

Según Infoagro.com (2007), los Trips (Frankliniella occidentalis), los trips se introducen en los botones florales cerrados y se desarrollan entre los pétalos y en los ápices de los vástagos. Esto da lugar a deformaciones en las flores que además muestran listas generalmente de color blanco debido a daños en el tejido por la alimentación de los trips. Las hojas se van curvando alrededor de las orugas conforme se van alimentando.

1.1.5. Araña

Para Investigación Vegetal Aplicada (2001), las arañitas pertenecen al grupo de los ácaros y se encuentran relacionadas con las arañas verdaderas. Tienen 8 patas, a diferencia de los insectos que tienen seis. Se alimentan solamente de la savia de las plantas, al perforar y succionar las células. Generalmente se encuentran en la superficie interior de las hojas.

Foto 7. Arr.) Amarillamiento característico en las hojas infectadas con araña. Abaj.Arañas parcialmente controlada en el envés de una hoja.

Las células vacías se tornan amarillas, produciendo manchas foliares. Al aumentar el daño las hojas se vuelven completamente amarillas y se caen. Cuando las producciones llegan a ser altas las telarañas llenas serán notorias; en este punto sin embargo, el problema será muy difícil de solucionar.

La dispersión de las arañas tiene lugar con frecuencia en la ropa de los trabajadores, razón por la cual es muy importante reconocer rápidamente la presencia de estos acaros. Es frecuente que los focos aparezcan siempre en el mismo lugar, de manera que es útil marcarlos y elaborar un plano de cultivo. Las arañitas viven en el envés de las hojas, por lo que las aspersiones deben dirigirse siempre allí.

Para infoagro.com, la araña roja (Tetranychus urticae), es la plaga más grave en el cultivo de rosal ya que la infestación se produce muy rápidamente y puede producir daños considerables antes de que se reconozca. Se desarrolla principalmente cuando las temperaturas son elevadas y la humedad ambiente es baja. Inicialmente las plantas afectadas presentan un punteado o manchas finas blanco-amarillentas en las hojas, posteriormente aparecen telarañas en el envés y finalmente se produce la caída de las hojas.

Foto 8. Arr.) Se pueden apreciar mejor las arañas, observándolas contra la luz, Aba.) Ataque activo de arañas en una hoja.

Foto 9. Araña observada bajoel microscopio