Cultivo in Vitro: Preparacion de Soluciones Madre (Murashige&Skoog 1962)

Las soluciones deben prepararse con mucho cuidado y precision. Las sales deben pesarse en una balanza granataria (prescision= 0.01 g) y en la balanza analitica se pesaran las vitaminas y reguladores de crecimiento (precision = 0.0001 g).

La conservacion de las soluciones madres se hara de 4-5 C. en el refrigerador, es recomendable no prolongar por mas de tres meses la conservacion de las soluciones madres de sales minerales. Las que contengan vitaminas y sustancias de crecimiento estables podran conservarse un maximo de 4 semanas.

1. MACRONUTRIENTES

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 1 L., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Foto 1. Algunos reactivos en estado puro.

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso deseado se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de macro nutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada, aproximadamente 100 ml.

Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo. Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 1 L. y con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico.

Foto 2. Preparacion de solucion madre de macronutrientes.

2.MICRONUTRIENTES

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 1 L., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso requerido se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Es importante que en los reactivos para la solución de micronutrientes se pese el valor requerido, porque con solo 1 miligramo de mas, o de menos, puede alterar el resultado final. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de micronutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada. Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo.

Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 200 ml. Con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico

3.QUELATO DE HIERRO

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer, agitador, rejilla de asbesto), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso requerido se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos.

En un Erlenmeyer se coloca el agua y el EDT y se lo lleva al fuego sobre una rejilla de asbesto. Cuando ha hervido se le adiciona el sulfato de hierro . Cuando vuelve a hervir se retira del fuego se deja enfriar. Se enrraza a 100 ml y se coloca en un envase color Ambar para evitar la degradacion de los componentes.

Foto 3. Der) preparacion de Quelato de hierro antes de colocar el sulfato de hierro. Izq) preparacion de Quelato de hierro despues de colocar el sulfato de hierro, notese el cambio de coloracion.

4.VITAMINAS.

Se prepara el material de vidrio a utilizar (Erlenmeyer de 100 mL., pipetas de varios tamaños), estos deben estar esterilizados, y secos. Se preparan los otros materiales a utilizarse (papel de aluminio cortado, piseta, balanza analítica, reactivos, espátula).

Se enciende la balanza analítica. Se coloca un cuadrado de papel aluminio y se encera la balanza. Una vez que la balanza esta en “0”, se procede a pesar el reactivo. Cuando se tiene el peso deseado se retira el mismo en el papel aluminio en el cual se peso y se lo reserva, hasta, terminar de pesar todos. Una vez que se ha terminado de pesar todos, se procede a preparar la solución de macro nutrientes.

Primeramente se lava el erlenmeyer con agua destilada y se coloca un poco de agua destilada. Se agrega los reactivos uno a uno, siempre limpiando el papel aluminio con la Piseta, para asegurar que no quede nada pegado en el mismo. Cuando se han agregado todos los reactivos, se enraza con agua destilada hasta completar 200 ml. y con un pedazo de papel de aluminio se tapa el erlenmeyer y se procede a mezclar; se puede utilizar un agitador magnetico

5.HORMONAS.

Las Auxinas y Giberelinas se disuelven con alcohol antiséptico (70º)

G3 10MG / ALCOHOL 5ML + AGUA DESTILADA 5 ML
ANA 12 MG / ALCOHOL 3 ML + AGUA DESTILADA 9 ML.
AIA 13 MG / ALCOHOL 5 ML + AGUA DESTILADA 8 ML.

Las Citocininas se disuelven con clorhídrico
BAP 10 MG…..HIDROXIDO 4 ML + AGUA DESTILADA 6 ML

Una vez prepradas las hormonas se las mantiene en congelación y al momento de utilizarlas se las calienta sobre una rejilla de asbesto las que se han congelado.