Se prepara y desinfecta la camara de flujo laminar, se enciende la cabina de flujo Laminar y el mechero de alcohol; Se atomiza alcohol, sobre el material a utilizar (jeringa, agitador, algodon y el vital del antagonista a sembrar). Con un algodón empapado de alcohol, se limpia la mesa de la cabina de flujo laminar.Cerca del mechero de alcohol, se abre el criotubo y con un agitador desinfectado se agita el contenido del vital, para que quede homogéneo. Se rocía la aguja de la jeringa con alcohol y se acerca a la flama del mechero, manteniéndolo hasta que llegue al rojo vivo.
Cuando alcanza el rojo vivo, se enfría la aguja en el medio de una caja Petri. Después se introduce la aguja en el criotubo y se siembra de varias formas:
· Se hace un rayado en forma de cuadrado en el medio PDA. · Se dejan caer unas gotas en el medio PDA.
· Se realizan las dos anteriores juntas.
Cuando se terminan de sembrar todas las cajas Petri, se coloca tape alrededor de cada una, procurando que quede sellada. Luego se corta plástico film y se envuelve la caja Petri, procurando estirarla para que se pegue mejor, después se marca con la fecha de siembra.
DE UNA CEPA A OTRA CEPA (REPLICADO DE CEPAS)
Se prepara y desinfecta la camara de flujo laminar, se enciende la cabina de flujo Laminar y el mechero de alcohol; Se atomiza alcohol, sobre el material a utilizar (jeringa, agitador, algodon y el vital del antagonista a sembrar). Con un algodón empapado de alcohol, se limpia la mesa de la cabina de flujo laminar.
Se rocía alcohol en el sacabocado y se flamea en el mechero de alcohol hasta que llegue al rojo vivo, se la enfría antes de realizar el bocado.
Cerca del mechero de alcohol, se abre caja petri con la cepa y con la ayuda de un sacabocados, se marcan circunferencias de 5 mm de diámetro. Con la ayuda de un agua flameada, se coge un bocado de la cepa y se coloca en el centro de una caja Petri con medio PDA.
Cuando se terminan de sembrar todas las cajas Petri, se coloca tape alrededor de cada una, procurando que quede sellada. Luego se corta plástico film y se envuelve la caja Petri, procurando estirarla para que se pegue mejor, después se marca con la fecha de siembra.
DE UN SUSTRATO A UNA CEPA
Se prepara y desinfecta la camara de flujo laminar, se enciende la cabina de flujo Laminar y el mechero de alcohol; Se atomiza alcohol, sobre el material a utilizar (jeringa, agitador, algodon y el vital del antagonista a sembrar). Con un algodón empapado de alcohol, se limpia la mesa de la cabina de flujo laminar.
Se rocía alcohol la aguja de una jeringa y se flamea en el mechero de alcohol hasta que llegue al rojo vivo. Luego se enfría la aguja en el medio de cultivo de una caja Petri, y con la misma aguja se coge un grano del sustrato colmado por el antagonista a sembrar y se coloca en el centro de una caja Petri con medio PDA.
Cuando se terminan de sembrar todas las cajas Petri, se coloca tape alrededor de cada una, procurando que quede sellada. Luego se corta plástico film y se envuelve la caja Petri, procurando estirarla para que se pegue mejor, después se marca con la fecha de siembra.
felicitaciones, muy ilustrativo, mi pregunta es como replicar de un medio liquido con trichoderma a una caja petri con PDA
ResponderEliminarhola, gracias por tu comentario... en lugar de sembrar el trichoderma solido, inocula la caja petri con 1 ml del producto liquido; no te preocuoes si se contamina, porque debes ir resembrando en varias cajas, hasta obtener la cepa pura.
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